摘要:目的 优化测序反应体系，寻求测序反应体系中引物的最佳使用量。方法 本实验选取不同引物量设计单因素水平试验进行研究，将BigDye使用量固定为2μL、模板使用量固定为2μL，引物量选取体积1μL、3μL、5μL，浓度1p、3.2p、10p进行DNA测序反应。结果 以平均信号强度、连续读取长度和QV20+为评判标准得出引物的最佳使用量。结论 在DNA模板纯度相对较好的情况下，测序反应体系中引物的最佳使用量为浓度：3.2p，体积：1μL

关键词：DNA测序  测序引物  单因素实验

Abstract:　Purpose To optimize the sequencing reaction system and seek the best usage sequencing primers in the reaction system.Methods This experiment takes different amount of primers designed to study the level of single factor experiment.To fix BigDye usage is 2μL, template fixed usage is 2μL, amount of primers selected volume 1μL , 3μL, 5μL, concentration1 p , 3.2 p, 10 p for DNA sequencing reaction. Results At an average signal strength, continuous read length and QV20 + to judge standards obtain the best use of the primer. Conclusion Under the condition of relatively good purity of DNA template,the best usage in the sequencing primer reaction system is concentration: 3.2 p, volume: 1μL     

Key Words：DNA sequencing  sequencing primers  single factor experiment

　　　DNA测序技术是分子生物学研究中最常用的技术，它的出现极大地推动了生物学的发展，广泛应用于分子生物学的研究[1]。传统的化学降解法、双脱氧链终止法以及在它们的基础上发展来的各种DNA测序技术统称为第一代DNA测序技术。第一代测序技术在分子生物学研究中发挥过重要的作用，如人类基因组计划(human genome project，HGP)主要基于第一代DNA测序技术[2]。1975年Sanger和Coulson发明了“加减法”测定DNA序列。1977年在引入双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)后，形成了双脱氧链终止法，使得DNA序列测定的效率和准确性大大提高[3] 。目前Sanger的双脱氧链终止法仍被广泛地应用。随着DNA测序技术的不断改进和仪器自动化程度的不断提高，使得DNA自动测序仪操作简化、灵敏度提高，对各种模板均能得到较好的测序结果[4]