摘要:目的 优化测序反应体系，研究样品模板量对DNA测序反应结果的影响。 方法 采用单因素水平实验进行研究，将BigDye使用量固定为2μL、引物1ul、DNA模板根据日常研究工作依次选取浓度20 ng/μL、100 ng/μL、500 ng/μL，体积1μL、3μL、6μL分别进行测序反应，得到不同的实验结果，以信号强度、QV20+及连续读取长度为评判标准，对结果进行分析比较，得到最优的DNA模板测序使用量。 结果 本实验选定BigDye2μL、引物1ul、DNA模板浓度100 ng/μL，体积1μL为最优反应体系，以此体系得到的信号强度最强、QV20+值最高，并且连续读取长度最长。 结论 在测序引物纯度相对较好的情况下，样品模板浓度100 ng/μL，体积1μL对DNA测序反应结果更为准确可靠。

关键词：测序模板；DNA测序；结果影响

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摘要

Abstract

引　言1

1 材料与方法3

1.1 材料3

1.1.1 实验样本3

1.1.2试剂3

1.1.3仪器与设备3

1.2方法3

1.2.1DNA模板的制备3

1.2.1.1接菌3

1.2.1.2质粒的提取4

1.2.1.3质粒的检测4

1.2.2测序反应5

1.2.2.1DNA样本模板量的实验设计5

1.2.2.2测序PCR反应条件6

1.2.2.3PCR测序反应6

1.2.3纯化6

1.2.4上机测序6

2.实验结果6

2.1模板量对信号强度实验结果7

2.2模板量对测序精密度的影响7

2.3模板量对连续读取长度的影响8

3.分析与讨论10

4.结论12

参考文献13

致 谢15